Compoziție chimică din oțel inoxidabil 347 Mărimea sângelui venos sau capilar, specific răspunsurilor SARS-CoV-2, celulelor T determină imunitatea la COVID-19.

Vă mulțumim că ați vizitat Nature.com.Utilizați o versiune de browser cu suport limitat pentru CSS.Pentru cea mai bună experiență, vă recomandăm să utilizați un browser actualizat (sau să dezactivați Modul de compatibilitate în Internet Explorer).În plus, pentru a asigura suport continuu, arătăm site-ul fără stiluri și JavaScript.
Glisoare care arată trei articole pe diapozitiv.Utilizați butoanele înapoi și următorul pentru a vă deplasa prin diapozitive sau butoanele controlerului de diapozitive de la sfârșit pentru a vă deplasa prin fiecare diapozitiv.

347 compoziție chimică din oțel inoxidabil

Compoziție chimică a tubului bobină din oțel inoxidabil 347

Compoziția chimică și proprietățile mecanice ale tubului spiralat din oțel inoxidabil 347 sunt după cum urmează:
- Carbon – 0,030% max
- Crom – 17-19%
- Nichel – 8-10,5%
- Mangan – 1% max

Proprietăți mecanice ale tubului bobină din oțel inoxidabil 347

Conform producătorului de tuburi spiralate din oțel inoxidabil 347, proprietățile mecanice ale tubului spiralat 347:
- Rezistența la tracțiune (psi) – 75.000 min
- Limita de curgere (psi) – 30.000 min
- Alungire (% în 2″) – 25% min
- Duritate Brinell (BHN) – 170 max

Aplicații și utilizări ale tubului spiralat din oțel inoxidabil 347

• Tub spiralat din oțel inoxidabil 347 folosit în fabricile de zahăr.
• Tub spiralat din oțel inoxidabil 347 utilizat în îngrășământ.
• Tub spiralat din oțel inoxidabil 347 utilizat în industrie.
• Tub spiralat din oțel inoxidabil 347 utilizat în centrale electrice.
• Tub spiralat din oțel inoxidabil 347 utilizat în alimente și produse lactate.
• Tub spiralat din oțel inoxidabil 347 utilizat în instalațiile de petrol și gaze.
• Producător de tuburi spiralate din oțel inoxidabil 347 utilizat în industria construcțiilor navale.

Se crede că celulele T specifice SARS-CoV-2 protejează împotriva infecției și progresiei COVID-19, dar nu există dovezi directe în acest sens.Aici, am comparat măsurătorile de sânge integral ale celulelor T pozitive cu interferon-γ specific SARS-CoV-2 cu rezultate pozitive ale testelor de diagnostic COVID-19 (PCR și/sau flux lateral) în decurs de 6 luni de la recoltarea de sânge a lui Lian.Printre 148 de participanți care au donat probe de sânge venos, amploarea răspunsului celulelor T specifice SARS-CoV-2 a fost semnificativ mai mare la cei care au rămas protejați decât la cei care au fost infectați (P < 0,0001).% risc de infecție, în timp ce intensitatea ridicată a redus acest risc la 5,4%.Aceste rezultate au fost generalizate la alți 299 de participanți care au testat un test de sânge capilar scalabil care ar putea facilita accesul la datele privind imunitatea celulelor T la scară populație (14,9% față de 4,4%).Astfel, măsurarea celulelor T specifice pentru SARS-CoV-2 poate prezice riscul de infecție și ar trebui evaluată atunci când se monitorizează starea imună a individului și a populației.
Măsurarea și înțelegerea răspunsului imunitar la infecția cu SARS-CoV-2 este importantă pentru a dezvolta strategii viitoare eficiente pentru a minimiza impactul asupra sănătății publice și economice al viitoarelor focare de COVID-19.Identificarea corelaților imune va oferi informații importante despre susceptibilitatea unei populații la infecția virală, posibil avertizare timpurie a spitalizărilor de vârf și, de asemenea, va permite oamenilor să-și gestioneze personal riscul de infecție și riscul de a infecta pe alții.Supravegherea imună s-a dovedit critică pentru a evalua eficacitatea vaccinurilor COVID-19 la pacienții sănătoși și cu risc ridicat1,2,3, în special la mutanții SARS-CoV-24, iar detectarea imunodeprimaților va însemna necesitatea de a întări imunitatea. Vaccinați-vă și preveniți viitoare focare.
Nivelul de imunitate al unei persoane la infecția cu SARS-CoV-2 depinde de mai mulți factori: încărcătura virală în momentul expunerii, variantele de virus, vârsta, starea anterioară de vaccinare/infecție, comorbidități, medicamente și, cel mai important, infecția anti-SARS-CoV. .2 răspunsul imun adaptiv apare în momentul expunerii la virus5.Evaluarea răspunsului imun la infecția cu SARS-CoV-2 și/sau vaccinarea s-a concentrat pe teste serologice care măsoară prezența anticorpilor specifici pentru o proteină structurală (de exemplu, glicoproteina cu vârf).Cu toate acestea, prezența sau absența anticorpilor singure nu determină cu acuratețe un răspuns imunitar protector, deoarece răspunsurile sunt atenuate semnificativ în timp6 și neutralizarea variantelor SARS-CoV-2 la indivizii în recuperare sau dublu-vaccinați Activitate slabă, ceea ce ar putea duce la o creștere mare. numărul de infecții incipiente7.Într-adevăr, protecția împotriva COVID-19 simptomatic cauzată de varianta Omicron (B.1.1.529) a scăzut la aproximativ 10% după doar 4-6 luni de vaccinare ARNm, deși protecția împotriva bolilor severe a persistat > 68% timp de cel puțin 7 luni8.Măsurarea răspunsurilor celulelor T cu memorie adaptivă, care conferă protecție pe termen lung împotriva infecției virale, este cel mai bun indicator al susceptibilității la infecția cu SARS-CoV-2 și, prin urmare, un indiciu mai bun al riscului de testare pozitivă pentru COVID-199, deoarece specificul T. celulele pot preveni infecția.fără seroconversie10,11.Cu toate acestea, măsurarea răspunsurilor celulelor T a primit mai puțină atenție din cauza dificultăților metodologice și a problemelor logistice în obținerea și transportul probelor de sânge venos, în special atunci când se efectuează studii observaționale ample pentru a evalua eficacitatea vaccinului și a monitoriza imunitatea.Cu toate acestea, indivizii vaccinați prezintă o activitate robustă a celulelor T împotriva variantelor SARS-CoV-2, compensând potențial pierderea reactivității anticorpilor pentru a limita severitatea COVID-1912,13.
Aici, am căutat să înțelegem dacă o singură măsurare a răspunsului celulelor T SARS-CoV-2 ar putea prezice riscul absolut de infecție cu SARS-CoV-2 în decurs de 6 luni de la prelevarea de sânge, indiferent de factorii anteriori care influențează imunitatea.Pentru a face testul cu celule T de mare capacitate și aplicabil la studii mai mari, am încercat, de asemenea, să facem testul miniaturizat, astfel încât să poată fi efectuat utilizând o probă de sânge capilară.
Am măsurat răspunsurile imune celulare și umorale la donatorii sănătoși folosind o detectare combinată a celulelor T SARS-CoV-2 și a anticorpilor IgG pe baza sângelui venos integral (pentru caracteristicile participanților, vezi martie 2022 14. La donatorii vaccinați, SARS-CoV-2- răspunsurile T-celulare specifice au fost determinate prin măsurarea nivelurilor plasmatice de interferon-γ (IFN-γ) în urma stimulării sângelui întreg cu peptida SARS-CoV-2 (ca anterior, ref. 14,15,16,17,18) și răspunsurile IgG asociate cu nucleocapsid (N) au fost crescute la cei care au raportat o infecție anterioară, deși ambele răspunsuri au fost mai mari la donatorii nevaccinați infectați anterior, maxime în organism (Fig. 1a, b). Răspunsurile IgG împotriva glicoproteinelor spike (RBD, S1, S2) au fost cele mai mari la donatorii vaccinați anterior infectați (Figura 1c–e).
Răspunsurile celulelor T IFN-γ+ specifice SARS-CoV-2 au fost măsurate prin analiza venoasă a sângelui integral și pe baza vaccinărilor participanților și a stării anterioare a infecției cu SARS-CoV-2 (confirmată prin PCR și/sau testul de flux lateral)" Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 82 (albastru), 'Vac-/Inf +' n = 4 (galben), 'Vac-/Inf-' n = 1 (nu se aplica).Reacțiile de legare la IgG specifice SARS-CoV-2 vizează nucleocapsidul („N”) (b; ****P <0,0001, **P = 0,0016), domeniu de legare la receptor cu vârfuri („RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), subunitatea de vârf 1 (“S1”) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) și subunitatea de vârf 2 („S2”) (e) a fost măsurată prin teste de sânge integral venos și pe baza vaccinării participantului și a SARS -CoV-2 anterioară (confirmată prin PCR și/ sau testul fluxului lateral) starea infectioasa.„Vac + /Inf +” n = 60 (verde), „Vac + /Inf-” n = 71-82 (albastru), „Vac-/Inf +” n = 4 (galben).Comparațiile au fost făcute folosind testul Kruskal-Wallis, ajustat pentru comparații multiple folosind testul Dunn.Datele sunt afișate sub formă de diagrame (linia centrală la mediană, limita superioară la percentila 75, limita inferioară la percentila 25) cu mustăți la valorile minime și maxime.Fiecare punct reprezintă un donator.Datele brute sunt furnizate sub formă de fișiere de date brute.
După prelevarea de sânge, participanții au fost rugați să-și raporteze singuri rezultatele pozitive ale PCR și/sau ale testelor de flux lateral pentru COVID-19;dacă participanții au fost testați pozitivi între 1 septembrie 2021 și 29 decembrie 2021, se presupune că aceștia sunt infectați cu varianta de coronavirus Delta (B.1.617.2) și Omicron (B.1.1.529) în Public Health Wales după 29 decembrie 2021, când această opțiune de îngrijorare devine dominantă.Printre 148 de donatori evaluabili, am observat o rată de infecție de 26,3% (39/148) în decurs de 6 luni de la donarea de sânge, dintre care 38 au primit o a doua sau a treia doză de vaccin COVID-19 (descoperirea infecției a avut loc după Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) vaccin ARNm sau vaccin AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));a fost infectat și un donator nevaccinat.Mărimea răspunsurilor celulelor T pozitive IFN-γ-specifice SARS-CoV-2 a fost semnificativ mai mică la cei care au raportat un test de diagnostic pozitiv pentru COVID-19 decât la donatorii neinfectați (P < 0,0001; Fig. 2a), în principal din cauza inducerea optimă a răspunsurilor celulelor T prin vaccinare la unii participanți (P = 0,050; Fig. 1 suplimentară).Nu a existat nicio corelație între magnitudinea răspunsului celulelor T IFN-γ+ și timpul până la un rezultat pozitiv al testului COVID-19 (Figura 2 suplimentară).În schimb, nici răspunsurile IgG care leagă RBD-, S1-, S2 (Figurile 2b-d), nici răspunsurile anticorpilor neutralizanți RBD-, S1 nu au fost specifice pentru SARS-CoV-2 de tip sălbatic sau delta (B.1.617).) (Figura suplimentară 3) poate face distincția între persoanele cu risc de infecție.Cu toate acestea, răspunsurile IgG N-legate scăzute împotriva SARS-CoV-2 s-au corelat cu riscul de infecție cu COVID-19 (P = 0,0084; Figura 2e);cei care au fost testați pozitiv au fost cu 85% mai puțin probabil (P = 0,00035; SAU 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (Figura suplimentară 4).
Probele de sânge venos de la donatori sănătoși (n = 148) au evaluat răspunsurile celulelor T IFN-γ+ specifice SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) și legarea receptorului Spike de SARS-CoV specific -2 stimuli.domeniul (“RBD”) (b), subunitatea Spike 1 (“S1″) (c), subunitatea Spike 2 (“S2″) (d) și nucleocapsid (“N”) (e; **P = 0,0084) .Identificați participanții care au fost testați pozitiv pentru COVID-19 (PCR și/sau flux lateral);toate infecțiile au apărut în decurs de 6 luni de la prelevarea de sânge.Comparațiile au fost făcute folosind un test Mann-Whitney cu două cozi.Datele sunt afișate sub formă de diagrame (linia centrală la mediană, limita superioară la percentila 75, limita inferioară la percentila 25) cu mustăți la valorile minime și maxime.Fiecare punct reprezintă un donator.ns nu este important.Harta termică f arată corelațiile de rang ale lui Spearman între variabilele pentru setul de date specificat.Comparațiile care nu au fost semnificative statistic au fost excluse din matrice și marcate cu celule goale.Datele brute sunt furnizate sub formă de fișiere de date brute.
Limita de diagnosticare pozitivă prestabilită de 14 a fost considerată prea arbitrară pentru a evalua riscul de reinfecție, așa că au fost stabilite intervale interquartile pentru a stabili parametrii de risc absolut.Modelul statistic, care a inclus doar variabile care au avut un efect semnificativ asupra rezultatelor, a arătat că amploarea răspunsului celulelor T IFN-γ+ SARS-CoV-2-specific a fost cel mai important biomarker imunitar pentru determinarea șanselor unui individ de a fi testat pentru COVID.-19 pozitiv (Figura 2f și Figura suplimentară 4).Pacienți cu un răspuns specific al celulelor T IFN-γ+ SARS-CoV-2 în a treia (194-489 pg/ml IFN-γ) și a patra (>489 pg/ml IFN-γ) quartile 65% (P = 0,055); SAU 0,35, IC 95%: 0,11–1,00) și 90% (P = 0,0050; OR 0,098, IC 95%: 0,014-0,42) au avut mai mulți participanți.Șansele sunt mici (Fig. 4 suplimentară).În general, participanții cu un răspuns specific al celulelor T SARS-CoV-2 din sânge venos ≤79 pg/mL IFN-γ au avut un risc de 43,2% de infecție episcopică la 6 luni, comparativ cu un răspuns > 489 pg/mL.ml de IFN-γ au avut un risc de infecție de 5,4% (tabelul 2).
Testarea venoasă a sângelui integral este limitată ca scop din cauza necesității de recoltare a probei de către flebotomist.Pentru a crește disponibilitatea testării celulelor T și IgG pentru SARS-CoV-2, a fost dezvoltată o metodă alternativă de prelevare a sângelui capilar, care să permită participanților să obțină probe de sânge la domiciliu.Din câte cunoștințele noastre, nu au existat rapoarte anterioare privind măsurarea funcției celulelor T specifice antigenului în probele de sânge capilar.O corelație puternică a fost demonstrată anterior între numărul de limfocite obținut folosind probe comparabile de sânge capilar și venos.În plus, s-a raportat că testele pe bază de sânge integral care măsoară răspunsurile celulelor T specifice SARS-CoV-2 utilizează doar 320 μL de sânge venos,20 eliminând îngrijorările cu privire la frecvența celulelor T progenitoare în probele de sânge capilar.
Am folosit acest test colaborativ standardizat de mare randament al celulelor T SARS-CoV-2 și anticorpilor IgG pe baza de sânge integral capilar pentru a măsura răspunsul imun celular și umoral la participanții cu diferite comorbidități și stare anterioară de vaccinare/infectie (Tabelul 1).recrutați din toată Marea Britanie între 24 ianuarie și 14 martie 202214. Majoritatea (90,9%) probelor de degete au fost obținute corect și trimise la laborator în 24 de ore de la recoltare.În unele cazuri, probele au fost primite în decurs de 48 de ore de la extragerea sângelui, dar niciuna dintre aceste probe nu a trecut de verificări de control al calității și nu a afectat măsurătorile generale ale celulelor T sau anticorpilor (Figura 5 suplimentară).Deși au existat diferențe în amploarea răspunsului celulelor T IFN-γ+ specifice SARS-CoV-2 măsurat în probele de sânge capilar și venos respective la unii indivizi, nu au existat diferențe semnificative în general (P = 0,88; Fig. 6 suplimentară). ).).
Răspunsurile celulelor T IFN-γ+ specifice SARS-CoV-2 au fost semnificativ crescute la persoanele vaccinate care au raportat, de asemenea, o infecție anterioară (P = 0,0001), dar nu semnificativ mai mari decât la persoanele donatoare nevaccinate infectate anterior (P = 0,19, Fig. 3a).).Răspunsurile IgG împotriva glicoproteinei spike (RBD, S1, S2) au fost semnificativ mai mari la donatorii vaccinați decât la donatorii nevaccinați, indiferent de starea anterioară de infecție (Figura 3b-d).Interesant, răspunsul mediu IgG legat de N a fost cel mai mare la participanții nevaccinați infectați anterior, comparativ cu participanții vaccinați, deși acest lucru nu a atins semnificație (Figura 3e).Printre donatorii nevaccinati și neinfectați care s-au auto-declarat, 15 din 37 (40,5%) participanți au fost pozitivi pentru IgG N-legate, peste pragul stabilit anterior de 2,0 BAU/mL14;acești 15 participanți Doisprezece dintre acești pacienți au fost testați pozitivi pentru răspunsul celulelor T IFN-γ+ peste pragul stabilit anterior de 22,7 pg/mL IFN-γ14.Prin urmare, este probabil ca acești participanți să fi fost infectați anterior cu SARS-CoV-2 și să nu fi fost testați pentru COVID-19 din cauza alegerii personale, a lipsei PCR și/sau a echipamentului de flux lateral sau să fie asimptomatici.Deși a existat o corelație semnificativă între răspunsurile celulelor T la nivelurile de IFN-γ+ și IgG N-legate la donatorii nevaccinați (P = 0,0044; Figura suplimentară, răspunsul IgG N-legat a scăzut mai repede decât răspunsul IgG N-legat, în timp ce IFN-γ + Răspunsurile celulelor T au fost menținute indiferent de starea de vaccinare, deși numărul de donatori la 50 de săptămâni după provocare a fost scăzut (Figura 8 suplimentară). Tipul de vaccinare a fost în general puțin diferit în răspunsurile IgG observate specifice pentru SARS-CoV-2, T. celule și RBD asociate, deși participanții care au primit două doze de BNT162b2 urmate de revaccinarea mRNA1273 au arătat niveluri semnificativ mai mari de celule IFN-γ + T au fost mai sensibile la SARS-CoV-2 decât cei care au primit două doze de ChAdOx1 și BNT162b2 (suplimentar Fig. 9) În plus, comorbiditățile raportate au avut o diferență generală mică în răspunsurile observate ale celulelor T în comparație cu donatorii sănătoși (Figura 10 suplimentară).
răspunsurile celulelor T IFN-γ+ specifice SARS-CoV-2 au fost măsurate prin testarea capilară a sângelui integral și s-au bazat pe vaccinările participanților și pe starea anterioară de infecție SARS-CoV-2 (confirmată prin PCR și/sau testul de flux lateral).„Vac + /Inf +” n = 42 (verde), „Vac + /Inf-” n = 158 (albastru), „Vac-/Inf +” n = 33 (galben), „Vac- /Inf-” n = 37 (gri).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .Reacții de legare a IgG specifice SARS-CoV-2 la domeniul de legare la receptorul spike ("RBD") (b; ****P < 0,0001, ns: nesemnificativ), subunitatea spike 1 ("S1") (c; * * **P < 0,0001, ns: nesemnificativ), subunitatea de vârf 2 („S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) și nucleocapsidă („N”) (e; ****P < 0,0001, ns nesemnificativ) au fost măsurate utilizând analiza venoasă a sângelui integral și pe baza vaccinărilor participanților și a SARS-CoV-2 anterioară (confirmată prin PCR și/sau analiza fluxului lateral) Infecțiile au fost subdivizate la stare.„Vac + /Inf +” n = 46 (verde), „Vac + /Inf-” n = 182 (albastru), „Vac-/Inf +” n = 34 (galben), „Vac-/Inf-” n = 37 (gri).Comparațiile au fost făcute folosind testul Kruskal-Wallis, ajustat pentru comparații multiple folosind testul Dunn.Datele sunt afișate sub formă de diagrame (linia centrală la mediană, limita superioară la percentila 75, limita inferioară la percentila 25) cu mustăți la valorile minime și maxime.Fiecare punct reprezintă un donator.Datele brute sunt furnizate sub formă de fișiere de date brute.
Ca și înainte, participanții au fost rugați să raporteze rezultate pozitive ale PCR și/sau ale fluxului sanguin lateral pentru COVID-19;conform Agenției de Sănătate din Regatul Unit, se presupunea că participanții au fost infectați cu coronavirusul Omicron (B.1.1.529) în momentul testării variantei pozitive de virus, deoarece acesta a fost varianta dominantă în Marea Britanie în perioada de studiu.Printre 299 de donatori evaluabili, am observat o rată de infecție de 8,0% (24/299) în trei luni de la donarea capilară, dintre care șapte nu au fost vaccinați.Proporția comorbidităților dintre toți participanții a fost mai mică la cei care au fost testați pozitiv pentru COVID-19 (10,7%) decât cei care au fost testați negativ pentru COVID-19 (24,4%, Tabelul 1), ceea ce se poate datora faptului că participanții cu anumite bolile sunt mai atente și protejează împotriva consecințelor potențiale, cum ar fi diabetul și cancerul.După cum sa observat într-o cohortă de sânge venos, celulele T pozitive pentru interferon-γ (IFN-γ) SARS-CoV-2 au fost măsurate în probe de sânge capilar de la indivizi care au raportat un test de diagnostic pozitiv pentru COVID-19.Mărimea răspunsului a fost semnificativ mai mică decât la donatorii neinfectați (P = 0,034; Figura 4a) din cauza inducerii relativ slabe a răspunsului celulelor T prin vaccinare și/sau infecție anterioară (Figura 11 suplimentară).În mod similar, nici răspunsurile IgG de legare RBD-, S1-, S2 (Figurile 4b-d), nici răspunsurile de anticorpi neutralizanți RBD-, S1 nu au fost specifice pentru SARS-CoV-2 de tip sălbatic sau delta (B. 1.617).(Figura suplimentară 12).Persoanele cu orice risc semnificativ de infecție pot fi identificate.Spre deosebire de cohorta venoasă, răspunsurile IgG legate de N nu diferențiază, de asemenea, riscul COVID-19 (Figura 4e), sugerând că varianta Omicron (B.1.1.529) crește evaziunea imună la indivizii infectați anterior, așa cum a fost descris recent 21. În schimb, puterea răspunsului celulelor T IFN-γ specifică SARS-CoV-2 a fost din nou cea mai importantă variabilă în determinarea șanselor individuale de testare pozitivă pentru COVID-19 (Figura 4f).În general, participanții cu un răspuns al celulelor T capilare specifice SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL IFN-γ au avut un risc de infecție de 14,9% la trei luni, comparativ cu un răspuns > 141,6 pg/mL.ml IFN.-γ a avut un risc de infectare de 4,4% (Tabelul 2).
Răspunsurile celulelor T IFN-γ+ specifice pentru SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) și domeniul de legare la receptorul IgG specific pentru SARS-CoV-2 („RBD”) (b), subunitatea de vârf 1 (' S1′) (c), subunitatea de vârf 2 („S2′) (d) și reacția de legare a nucleocapsidelor („N”) (e).Participanții identificați ca fiind pozitivi pentru testele COVID-19 (PCR și/sau test de flux sanguin lateral), toate infecțiile au avut loc în decurs de 3 luni de la prelevarea de sânge.Comparațiile au fost făcute folosind un test Mann-Whitney cu două cozi.Datele sunt afișate sub formă de diagrame (linia centrală la mediană, limita superioară la percentila 75, limita inferioară la percentila 25) cu mustăți la valorile minime și maxime.Fiecare punct reprezintă un donator.ns nu este important.Harta termică f arată corelațiile de rang ale lui Spearman între variabilele pentru setul de date specificat.Comparațiile care nu au fost semnificative statistic au fost excluse din matrice și marcate cu celule goale.Datele brute sunt furnizate sub formă de fișiere de date brute.
Pe măsură ce trecem la următoarea fază a pandemiei de COVID-19, accentul se va muta de la prevenire la managementul individual al riscurilor și identificarea membrilor vulnerabili ai societății.Stabilirea corelațiilor imunității la COVID-19 este esențială pentru identificarea și tratarea eficientă a acestor grupuri cu risc ridicat.Acum există dovezi tot mai mari că imunitatea celulelor T protejează împotriva infecției cu SARS-CoV-2 și limitează severitatea COVID-1910.Datele prezentate aici demonstrează că puterea combinată a răspunsurilor celulelor T IFN-γ+ specifice SARS-CoV-2 împotriva proteinelor structurale cu vârf, membrană și nucleocapside conferă o protecție mai mare împotriva COVID-19 decât legarea anticorpilor.19 promovează sau neutralizează răspunsurile. .și ar trebui luate în considerare atunci când se evaluează imunitatea individuală și/sau de turmă.Virușii ARN precum SARS-CoV-2 sau virusul gripal A (IAV) evită neutralizarea serologică prin evoluția rapidă a epitopilor de celule B expuși pe antigenii de suprafață recunoscuți de anticorpi.Răspunsul imun protector oferit de celulele T poate reflecta țintirea epitopilor din regiuni mai conservate ale proteinelor virale care nu pot scăpa rapid de un răspuns imun.Protecția mediată de celule T împotriva variantelor noi SARS-CoV-2 este similară cu protecția heterosubtipică mediată de țintirea celulelor T a proteinelor intrinseci conservate observate în subtipurile IAV22,23.
În ciuda potențialului enorm de măsurare a răspunsului imun celular la COVID-19, s-a acordat relativ puțină atenție dezvoltării unor teste standardizate cu celule T precise, de mare capacitate.Complexitățile și costurile tradiționale asociate cu măsurarea răspunsurilor celulelor T împiedică determinarea cu precizie a imunității celulelor T atunci când se verifică imunitatea populației mari.În timp ce mai multe teste comerciale de stimulare a peptidelor din sânge integral au devenit disponibile recent, toată lumea are nevoie în prezent de un flebotomist pentru a obține sânge, limitând disponibilitatea și scala.Sistemele de sânge capilar sunt utilizate pe scară largă pentru a determina prevalența anticorpilor SARS-CoV-2 într-o populație.Am adaptat testele de sânge capilar pentru a efectua teste de stimulare a peptidelor din sângele întreg pentru a evalua reactivitatea celulelor T la proteinele structurale SARS-CoV-2 și răspunsurile anticorpilor specifici SARS-CoV-2.De fapt, măsurarea combinată a anticorpilor specifici SARS-CoV-2 și a celulelor T din aceeași probă de sânge capilar este foarte atractivă: (i) reduce nevoia de mai multe teste de sânge per participant, (ii) îmbunătățește experiența și înțelegerea participantului;(iii) îmbunătățirea logisticii și reducerea dublării, (iv) reducerea impactului asupra mediului, deoarece sunt necesare mai puține consumabile de laborator și livrarea de probe.Deși reactivitatea generală a IFN-γ a fost similară între probele de sânge venoase și capilare potrivite, s-a observat că este mai mică în cohorta de sânge capilar de participanți (Fig. 4a) comparativ cu cohorta de sânge venos (Fig. 2a).Valorile IFN-γ Există mai multe explicații pentru această constatare, și anume, un număr mare de participanți cu comorbidități care necesită terapie imunosupresoare au fost recrutați în cohorta de prelevare de sânge capilar (Tabelul 1) și Viabilitatea și/sau funcția celulelor T obținute din vascularizație. probele pot fi scăzute, mai ales ținând cont de condițiile de depozitare pe termen lung a probelor înainte de stimularea peptidei.
Vaccinul COVID-19 disponibil pe scară largă în prezent oferă cea mai bună protecție împotriva bolilor severe pentru majoritatea beneficiarilor în decurs de 6 luni de la vaccinare8.În mod încurajator, în ciuda neutralizării serologice slabe induse de vaccin a variantelor SARS-CoV-26,7, răspunsurile celulelor T provocate de vaccinarea împotriva SARS-CoV-2 de tip sălbatic au rămas foarte reactive, deoarece au apărut alte 25.Datele pe care le prezentăm aici demonstrează importanța unei evaluări mai ample a imunogenității vaccinului, evidențiind vaccinurile cu imunitate insuficientă a celulelor T pentru a preveni infecția bruscă și transmiterea persistentă a virusului.Am observat, de asemenea, că mulți indivizi nevaccinați recrutați în cohorta capilară au avut un răspuns semnificativ al celulelor T specifice SARS-CoV-2 (și IgG care leagă N) indiferent de vaccinarea anterioară, care se datorează probabil unei infecții anterioare.Mai degrabă decât vaccinarea persoanelor adecvate, riscul lor de infecție ar trebui evaluat pe baza stării lor actuale de imunizare și a alegerilor informate făcute.
Limitările acestui studiu includ asigurarea că participanții au auto-raportat infecția cu SARS-CoV-2 după recoltarea de sânge pentru a determina relevanța imunității;unii participanți pot avea infecție asimptomatică și nu pot fi supuși testării PCR și/sau a fluxului lateral pentru COVID-19.Setul nostru de date nu avea, de asemenea, informații despre medicamentele participanților la momentul prelevării probelor de sânge.În plus, având în vedere că toți participanții noștri au raportat doar simptome ușoare/moderate sau niciun simptom, nu a fost posibil să identificăm răspunsurile imune din setul nostru de date care au prezis un risc crescut de îmbolnăvire severă și spitalizare pentru COVID-19.Cu toate acestea, prezența răspunsurilor celulelor T CD8+ împotriva epitopilor specifici nucleocapsidelor a fost recent asociată cu protecția împotriva COVID-1926 sever.În plus, testul utilizat aici nu a măsurat răspunsurile celulelor T la anumite proteine ​​nestructurale SARS-CoV-2 exprimate timpuriu, care s-a dovedit recent că se acumulează în mod preferențial la lucrătorii din domeniul sănătății seronegativi care au fost în contact cu pacienți infectați.Pe baza acestei lucrări, având în vedere prevalența transmiterii comunitare la momentul recrutării și probabilitatea mare de infecție de contact în populație, numărul de celule T specifice SARS-CoV-2 găsite în testele noastre pare să fie, de asemenea, capabil să fie eliminat.infecții subclinice în cohortele noastre.În cele din urmă, nu am măsurat producția de interleukină 2 de către celulele T, deoarece munca noastră anterioară a demonstrat o identificare slabă a răspunsurilor specifice celulelor T SARS-CoV-214, deși răspunsurile specifice IL-2 pot indica o reactivitate încrucișată preexistentă.celule asociate cu apărarea împotriva infecției cu SARS-CoV-211.
Luate împreună, aceste date evidențiază nevoia fundamentală de studii longitudinale pe termen lung care încorporează răspunsurile celulelor T specifice SARS-CoV-2 în măsurile imunității la scară populație.Aceste eforturi pot fi ajutate de dezvoltarea unui nou test de sânge capilar care măsoară răspunsul celulelor T.
Proiectul de cercetare a recrutat participanți din februarie 2021 până în martie 2022. Cohorta de donatori sănătoși (n = 148) care au donat probe de sânge venos a constat în principal din personalul universitar și studenții care participau la serviciul de screening COVID-19 al Universității Cardiff sau din personalul unei școli primare din Cardiff.Toți participanții au fost altfel sănătoși și nu au raportat că au luat niciun medicament imunosupresor (a se vedea tabelul 1 pentru caracteristici).Cohorta de participanți care au donat probe de sânge capilar a inclus toți donatorii voluntari (cu vârsta de peste 18 ani) din întreaga Marea Britanie.Între 24 ianuarie și 14 martie 2022, 342 de participanți au fost înscriși în studiu, dintre care 299 au prezentat probe de sânge la laborator.Mulți participanți au rămas nevaccinați și/sau au raportat comorbidități grave, inclusiv boli autoimune și cancer (a se vedea tabelul 1 pentru caracteristici).Acest studiu a primit aprobarea etică de la Newcastle and North Tyneside 2 Research Ethics Committee (ID IRAS: 294246) și Cardiff University School of Medicine Research Ethics Committee (SREC ref: SMREC 21/01).Toți participanții și-au dat consimțământul informat scris înainte de includere.Participanții nu au primit nicio compensație pentru participarea la acest studiu.
Probele de sânge venos au fost obținute prin puncție venoasă în 6 sau 10 ml vacutainere cu heparină de litiu sau sodiu (BD).Probele de sânge capilar au fost obținute cu o lancetă de deget și apoi colectate în microcontainere cu heparină (BD).Este necesar un minim de 400 µl de sânge;orice probă mai mică decât această sumă va fi respinsă.Alte motive pentru respingerea probei au inclus coagularea masivă și/sau hemoliza și eșecul de a colecta plasmă vâscoasă pentru analiză (Figura 5 suplimentară).Un total de 299 de probe de sânge capilar au fost disponibile pentru evaluarea răspunsurilor anticorpilor, dintre care 270 de probe au fost, de asemenea, disponibile pentru evaluarea răspunsurilor celulelor T.
Răspunsurile celulelor T specifice SARS-CoV-2 au fost evaluate utilizând testul Immuno-T COVID-19 (ImmunoServ Ltd) și efectuate așa cum s-a descris anterior14.Pe scurt, un vacutainer venos cu heparină de sodiu (BD) de 6 ml sau 10 ml a fost luat de la fiecare participant și procesat în laborator în 12 ore de la recoltarea sângelui.Deși majoritatea probelor au fost procesate în 24 de ore, un sânge capilar cu microsângerare heparinizată (BD) de 400-600 μl a fost colectat în 48 de ore de la prelevarea prin injecție.Probele de sânge venos și/sau capilar au fost stimulate cu grupuri separate de peptide specifice pentru SARS-CoV-2 (varianta de tip sălbatic), așa cum s-a descris anterior14.Această bibliotecă de peptide conține 420 de secvențe 15-mer cu 11 aminoacizi suprapusi care acoperă întreaga proteină spike (S1 și S2) (S; proteina NCBI: QHD43416 1), fosfoproteina nucleocapside (NP; proteina NCBI: QHD43423 2) și glicoproteina membranară (M) Proteina NCBI: QHD43419 1) secvențe de codificare (denumite „bibliotecă de peptide combinatorii S-/NP-/M”).Toate peptidele au fost purificate la >70%, dizolvate în apă sterilă și utilizate la o concentrație finală de 0,5 μg/ml per peptidă.Probele au fost incubate la 37°C timp de 20-24 ore.Tuburile au fost apoi centrifugate la 5000 x g timp de 3 minute și s-au colectat ~150 pl de plasmă din partea superioară a fiecărei probe de sânge.Păstrați probele de plasmă la -20°C timp de până la o lună înainte de a efectua testele de detectare a citokinelor/anticorpilor.
IFN-y a fost măsurat utilizând IFN-y ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, numărul de catalog 430116) și a fost efectuat conform instrucțiunilor producătorului.Imediat după ce a fost adăugată soluția de oprire (2N H2SO4), microplaca a fost citită la 450 nm folosind un cititor de plăci BioLegend Mini ELISA.IFN-γ a fost cuantificat prin extrapolarea curbei standard folosind GraphPad Prism.Valorile sub limita inferioară de detecție a testului au fost înregistrate ca 7,8 pg/ml, valorile peste limita superioară de detecție a testului au fost înregistrate ca 1000 pg/ml.
Anticorpii IgG anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N au fost măsurați folosind un panou 4-plex Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 (Bio-Rad, nr. cat. 12014634) și etichetați conform instructiunile producatorului.instrucțiuni .Probele care raportau valori peste limita de cuantificare au fost reanalizate la o diluție de 1:1000.Intensitatea medie de fluorescență a perlelor a fost măsurată pe un instrument Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Concentrațiile de anticorpi au fost calculate prin testul de control unic VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) și convertite în unități standard de referință internaționale WHO/NIBSC 20/136 (BAU/mL) utilizând factorul de calibrare al producătorului.
Anticorpii de neutralizare specifici subunității RBD și S1 împotriva liniilor SARS-CoV-2 de tip sălbatic și delta (B.1.617) SARS-CoV-2 au fost măsurați utilizând kitul de anticorpi de neutralizare a variantei SARS-CoV-2 uman Bio-Plex Pro (Bio -Rad , cod piesa 12016897), conform instructiunilor producatorului.Măsurați intensitatea medie a fluorescenței pe Bio-Plex 200 (Bio-Rad) și calculați procentul de inhibiție (adică neutralizarea) folosind următoarea formulă:
Testele de neutralizare infecțioasă pentru SARS-CoV-2 au fost efectuate așa cum s-a descris anterior28.Pe scurt, 600 PFU de SARS-CoV-2 de tip sălbatic au fost incubate cu diluții în serie de 3 ori de plasmă în duplicat timp de 1 oră la 37°C.Amestecul a fost apoi adăugat la celulele VeroE6 timp de 48 de ore.Monostraturile au fost fixate cu 4% paraformaldehidă, permeabilizate cu 0,5% NP-40 și incubate timp de 1 oră în tampon de blocare (PBS care conține 0,1% tween și 3% lapte degresat).Anticorpul primar (anti-nucleocapsid 1C7, Stratech) a fost adăugat la tamponul de blocare timp de 1 oră la temperatura camerei.După spălare, un anticorp secundar (IgG-HRP anti-șoarece, Pierce) a fost adăugat la tamponul de blocare timp de 1 oră.Monostraturile au fost spălate, dezvoltate folosind Sigmafast OPD și citite pe un cititor de plăci Clariostar Omega.Godeuri fără virus, fără virus dar fără anticorpi și seruri normalizate care prezintă activitate intermediară au fost incluse în fiecare experiment ca martori.
Analiza statistică a fost efectuată în GraphPad Prism (versiunea 9.4.1).Normalitatea setului de date a fost testată folosind testul Shapiro-Wilk.Au fost utilizate criterii neparametrice pentru toate comparațiile.Testul Mann-Whitney a fost utilizat pentru probele nepereche.Toate testele au fost cu două fețe, cu un prag de semnificație nominală de P ≤ 0,05.
Analiza exploratorie inițială a setului de date a fost făcută în R (versiunea 4.0.3).Aceasta include dezvoltarea matricei de corelare a rangului univariat a lui Spearman, unde corelația dintre două variabile este reprezentată de mărimea și culoarea pătratelor.Semnificația statistică între asocieri a fost calculată folosind rho Spearman, unde valorile ≤0,05 au fost considerate semnificative.Comparațiile care nu au fost semnificative statistic au fost excluse din matrice și marcate cu celule goale.Valorile P au fost ajustate pentru comparații multiple folosind corecția lui Holm.Un model de regresie logistică binar a fost utilizat pentru a simula efectul variabilelor din setul de date asupra răspunsului pozitiv la COVID-19.Răspunsurile celulelor T IFN-y și scorurile titrului IgG anti-RBD/S1/S2/N au fost convertite în factori, în care fiecare individ a fost repartizat cuartilului corespunzător pentru fiecare scor.După aceea, a fost dezvoltat un model de cercetare inițial folosind funcția glm din pachetul statistic (V4.0.3).Ratele de cote derivate din acest model original au fost extrase din coeficienții modelului folosind funcția „odds_plot” din pachetul OddsPlotty (V1.0.2).La dezvoltarea modelului de validare încrucișată, am folosit funcția „bestglm” din pachetul bestglm (V0.37.3) pentru a limita părtinirea utilizatorului și pentru a ne asigura că poate fi selectat cel mai bun subset de predictori.Metoda aleasă a fost „exhaustivă”, iar criteriul de informare utilizat pentru a evalua potrivirea modelului a fost AIC.Același flux de lucru descris mai sus a fost utilizat pentru a obține raportul de cote.
Pentru mai multe informații despre proiectarea studiului, consultați rezumatul studiului Nature legat de acest articol.
Scrisorile și cererile de materiale ar trebui să fie îndreptate către Dr. Martin Scarr sau profesorul Andrew Godkin.Acest articol oferă datele originale.
Codul R utilizat pentru crearea modelelor statistice este disponibil public fără cerere29.Informațiile și licențele de retipărire pot fi găsite la www.nature.com/reprints.
Munro, APS și colab.Siguranța și imunogenitatea a șapte vaccinuri COVID-19 ca a treia doză (rapel) după două doze de ChAdOx1 nCov-19 sau BNT162b2 (COV-BOOST) în Marea Britanie: un studiu de fază 2, orb, multicentric, randomizat, controlat.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV şi colab.Imunogenitatea, siguranța și reactogenitatea vaccinării primare heterologe împotriva COVID-19 (Com-COV2) folosind ARNm, vectori virali și vaccinuri cu adjuvant proteic în Regatul Unit: un studiu de fază 2, single-orb, randomizat, test de non-inferioritate.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB și colab.Eficacitatea vaccinurilor COVID-19 la pacienții imunocompromiși: o revizuire sistematică și meta-analiză.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. şi colab.Scăderea neutralizării variantei de microni SARS-CoV-2 B.1.1.529 de către ser după imunizare.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y și Baliser RD Infecție revoluționară la persoanele vaccinate SARS-CoV-2: măsurare, cauze și consecințe.Preot Național de Imunologie.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG şi colab.Răspuns umoral imunitar slăbit la vaccinul BNT162b2 Covid-19 timp de 6 luni.N. ing.J. Medicină.385, e84 (2021).
Carreño, JM și colab.Activitatea serurilor convalescente și a vaccinului împotriva SARS-CoV-2 Omicron.Natura 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. şi colab.Durata de protecție a vaccinului ARNm din Qatar împotriva subvariantelor Omicron SARS-CoV-2 BA.1 și BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ şi colab.Frecvența celulelor B de memorie scade odată cu infecția revoluționară a vaccinului delta COVID-19.Medicina Moleculara EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. şi colab.Celulele T cu memorie încrucișată sunt asociate cu protejarea contactelor cu COVID-19 de infecția cu SARS-CoV-2.Comuna nationala.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH și colab.Răspunsuri distincte ale celulelor T și celulelor B SARS CoV-2 omicron-reactive la destinatarii vaccinului COVID-19.știința.Imunologie.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu și colab.Celulele T specifice SARS-CoV-2 moștenite recunosc încrucișat variantele Omicron.Medicina nationala.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ și colab.Măsurarea celulelor T specifice SARS-CoV-2 din sângele integral dezvăluie infecția asimptomatică și imunogenitatea vaccinului la indivizi sănătoși și la pacienții cu cancer de organe solide Imunologie https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT şi colab.Măsurarea rapidă a celulelor T cu vârf SARS-CoV-2 în sângele integral al persoanelor vaccinate și infectate natural.J. Clinic.investi.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Răspunsul la vaccinul COVID-19 la pacienții cu scleroză multiplă.instalare.Neuroni.91, 89–100 (2022).
Bradley RE și colab.Infecția persistentă cu COVID-19 cu sindromul Wiskott-Aldrich a dispărut după vaccinarea terapeutică: raport de caz.J. Clinic.Imunologie.42, 32–35 (2022).